慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞及肝组织中HBV cccDNA定量检测

作者：郝勇; 苗千里; 缪晓辉; 赵克开; 李东良; ...肝炎病毒乙型dna环状单个核细胞肝

摘要：目的优化HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）特异性定量检测方法，并观察HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）及肝组织中的分布情况。方法标本抽提核酸后，以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶（PSAD）进行酶切，再以跨双缺口的特异性引物进行荧光PCR定量检测HBV cccDNA；用10份HBV高滴度（10^7拷贝／mL）血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品，验证此检测方法的特异度和灵敏度；取慢性乙型肝炎患者PBMC和肝组织穿刺标本各50份，检测其总HBVDNA和cccDNA。结果10份血清标本均无假阳性cccDNA检测结果，灵敏度可达到103拷贝／mL。所有PBMC中cccDNA检测均阴性；所有肝组织中总HBVDNA和cccDNA检测均阳性，总HBVDNA含量为3．19×10^3～6．69×10^7拷贝／μg人基因组DNA，cccDNA含量为7．32×10^0～6．51×10^6拷贝／μg人基因组DNA，同一患者肝组织中总HBVDNA含量是cccDNA含量的10．7倍至9．2×10^5倍。结论本方法特异度和灵敏度高。PBMC不能支持HBV的复制。在慢性乙型肝炎患者的肝组织中均可检测到cccDNA，但其水平并非与细胞内总HBV DNA水平正相关。

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